Результаты идентификации кампилобактерий, выделенных от убойной птицы методом масс-спектрометрии
Доклад завотдела ветсанэкспертизы ФГБУ ЦНМВЛ Ольги Ивановой на Международном ветеринарном конгрессе в Казани.
21.04.2014
Источник: SoyaNews
О.Е. Иванова, завотдела ветсанэкспертизы ФГБУ ЦНМВЛ
Д.И. Скородумов д.в.н., проф.МГУПП
В.И. Белоусов д.в.н., проф. ФГБУ ЦНМВЛ
Введение. Кампилобактериоз относится к числу значимых пищевых инфекций. Из продуктов убоя животных наиболее частому обсеменению кампилобактериями подвержено мясо птицы. На сегодняшний день по-прежнему актуальна проблема быстрой и достоверной идентификации изолированных кампилобактерий.
Для идентификации микроорганизмов в бактериологии используют большое количество методов основанных на определении фенотипических и генотипическцх характеристик. В последнее время с целью идентификации микроорганизмов активно применяют серологические, биохимические, а также геномные методы, например, генетические подходы с анализом последовательностей ДНК в микробных клетках, а также используют цифровую геномную информацию для обнаружения генов 16S рРНК. Нение ПЦР диагностика при массовых бактериологических исследованиях требует существенных материальных затрат и, кроме того, занимает довольно много времени.
Базовым методом идентификации бактерий в пищевой микробиологии по-прежнему остается определение специфического набора ферментов присущего определённому патогену. В тоже время в последние годы в практику лабораторного контроля внедряются новые технологии быстрой идентификации бактерий присутствующих в биоматериалах и пищевых продуктах, что открывает новые возможности для эпизоотологического и эпидемиологического мониторинга. К категории подобных методов относится идентификация микроорганизмов с помощью масс-спектрометрии (MALDI Biotyper), которая включает в себя анализ экспрессии константных белков бактериальной клетки с помощью масс-спектров. В итоге проводится сравнение спектров исследуемых образцов со спектрами эталонных штаммов микроорганизмов, имеющимися в базе данных прибора, взятых из международной коллекции стандартных образцов. Данный метод имеет ряд преимуществ, важнейшим из которых является простота исследования с минимальной затратой времени, высокая специфичность, что в свою очередь позволяет осуществить быструю и надёжную видовую идентификацию, а также штаммовую дифференциацию микроорганизмов, что несомненно важно как при диагностике инфекционных болезней животных и человека, так и при определении микробиологической безопасности пищевых продуктов.
Цель нашей работы заключалась в определении уровня контаминации кампилобактериями тушек птицы в рамках мониторинга безопасности продукции птицеперерабатывающих предприятий на территории Московского региона, а также выяснении видового состава изолированных кампилобактерий. Идентификацию бактерий проводили с использованием масспектрометра MALDI Biotyper Microflex, Bruker daltonic (США, Германия).
Материалом для микробиологического исследования служили смывы с тушек убойных кур и содержимое слепой кишви. В 2013г было исследовано 800 материалов (540 тушек птицы, 260 – содержимое слепой кишки), отобранных на птицеводческих предприятиях Московской области. Для выделения камоилобактерий в данной работе использовалась жидкая оитательная среда бульон Preston, Himedia, посевы инкубировали в микроаэрофильных условиях в течение 4ч при 37°С, затем 20ч при температуре 41,5°С. После чего, производили пересев на плотную питательную среду, используя основу коммерческой питательной среды Мюллер-Хинтон в модификации (внесение «гретой» крови (7%), дрожжевого экстракта (5%) и глюкозы (0,3%), а также селективной добавки Campylobacter Supplement-I (Blaser-Wang).
Результаты исследований. В процессе исследований было выделено 53 штамма кампилобактерий из смывов с тушек птицы, и 17 штаммов – из содержимого слепой кишки. Результаты идентификации изолятов представлены в таблице.
Результаты идентификации выделенных культур кампилобактерий:
Д.И. Скородумов д.в.н., проф.МГУПП
В.И. Белоусов д.в.н., проф. ФГБУ ЦНМВЛ
Введение. Кампилобактериоз относится к числу значимых пищевых инфекций. Из продуктов убоя животных наиболее частому обсеменению кампилобактериями подвержено мясо птицы. На сегодняшний день по-прежнему актуальна проблема быстрой и достоверной идентификации изолированных кампилобактерий.
Для идентификации микроорганизмов в бактериологии используют большое количество методов основанных на определении фенотипических и генотипическцх характеристик. В последнее время с целью идентификации микроорганизмов активно применяют серологические, биохимические, а также геномные методы, например, генетические подходы с анализом последовательностей ДНК в микробных клетках, а также используют цифровую геномную информацию для обнаружения генов 16S рРНК. Нение ПЦР диагностика при массовых бактериологических исследованиях требует существенных материальных затрат и, кроме того, занимает довольно много времени.
Базовым методом идентификации бактерий в пищевой микробиологии по-прежнему остается определение специфического набора ферментов присущего определённому патогену. В тоже время в последние годы в практику лабораторного контроля внедряются новые технологии быстрой идентификации бактерий присутствующих в биоматериалах и пищевых продуктах, что открывает новые возможности для эпизоотологического и эпидемиологического мониторинга. К категории подобных методов относится идентификация микроорганизмов с помощью масс-спектрометрии (MALDI Biotyper), которая включает в себя анализ экспрессии константных белков бактериальной клетки с помощью масс-спектров. В итоге проводится сравнение спектров исследуемых образцов со спектрами эталонных штаммов микроорганизмов, имеющимися в базе данных прибора, взятых из международной коллекции стандартных образцов. Данный метод имеет ряд преимуществ, важнейшим из которых является простота исследования с минимальной затратой времени, высокая специфичность, что в свою очередь позволяет осуществить быструю и надёжную видовую идентификацию, а также штаммовую дифференциацию микроорганизмов, что несомненно важно как при диагностике инфекционных болезней животных и человека, так и при определении микробиологической безопасности пищевых продуктов.
Цель нашей работы заключалась в определении уровня контаминации кампилобактериями тушек птицы в рамках мониторинга безопасности продукции птицеперерабатывающих предприятий на территории Московского региона, а также выяснении видового состава изолированных кампилобактерий. Идентификацию бактерий проводили с использованием масспектрометра MALDI Biotyper Microflex, Bruker daltonic (США, Германия).
Материалом для микробиологического исследования служили смывы с тушек убойных кур и содержимое слепой кишви. В 2013г было исследовано 800 материалов (540 тушек птицы, 260 – содержимое слепой кишки), отобранных на птицеводческих предприятиях Московской области. Для выделения камоилобактерий в данной работе использовалась жидкая оитательная среда бульон Preston, Himedia, посевы инкубировали в микроаэрофильных условиях в течение 4ч при 37°С, затем 20ч при температуре 41,5°С. После чего, производили пересев на плотную питательную среду, используя основу коммерческой питательной среды Мюллер-Хинтон в модификации (внесение «гретой» крови (7%), дрожжевого экстракта (5%) и глюкозы (0,3%), а также селективной добавки Campylobacter Supplement-I (Blaser-Wang).
Результаты исследований. В процессе исследований было выделено 53 штамма кампилобактерий из смывов с тушек птицы, и 17 штаммов – из содержимого слепой кишки. Результаты идентификации изолятов представлены в таблице.
Результаты идентификации выделенных культур кампилобактерий:
|
Вид кампилобактерий |
Метод идентификации MALDI-TOF MS |
|
C. jejuni subsp. jejuni |
24/70 (34,2%) |
|
C. jejuni subsp. doylei |
46/70 (65,8%) |
|
Некорректная идентификация (требуется определение
дополнительных дифференцирующих признаков) |
- |
Выводы:
- Согласно результатам исследований тушки убойной птицы в 9,8% случаев контаминированы C. jejuni subsp. jejuni (34,2%) и C. Jejuni subsp. doylei (65,8%).
- Метод масс-спектрометрии с использованием системы MALDI Biotyper Microflex, Bruker daltonic позволил в один этап идентифицировать 100% выделенных культур кампилобактерий как подвиды C. jejuni subsp. jejuni и C. jejuni subsp. doylei с минимальными затратами времени и расходных материалов и без использования дополнительных дифференцирующих тестов.
регион:
Россия
