Биологический метод обезвреживания кормов от микотоксинов

Среди многочисленных факторов окружающей среды токсические вещества - микотоксины, образуемые микроскопическими грибами, в последнее время привлекают все большее внимание. С одной стороны, токсигенные грибы чрезвычайно широко распространены в природе, и при благоприятных условиях (повышенная влажность и температура) они могут поражать различные кормовые и пищевые продукты и наносить существенный урон народному хозяйству. С другой стороны, потребление продуктов и кормов, контаминированных грибами и микотоксинами, может сопровождаться тяжелыми заболеваниями сельскохозяйственных животных и человека - микотоксикозами.

Сотрудники отдела токсикологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» более 25 лет занимаются проблемой микотоксинов. Накопленный за это время опыт и многочисленные выезды на сельскохозяйственные предприятия свидетельствуют, что, несмотря на широкое распространение микотоксикозов животных, опасность микотоксинов на практике зачастую недооценивают, а иногда специалисты просто недостаточно информированы. Предотвратить микотоксикозы на ферме специалистам хозяйств крайне трудно. Поэтому основой профилактики микотоксикозов сельскохозяйственных животных должны быть комплексные мероприятия, направленные на предотвращение или сведение к минимуму уровня загрязнения микотоксинами кормов на всех этапах их производства, транспортировки, хранения и использования (М.Я. Тремасов, 2002; А.В. Иванов и др., 2008).

В настоящее время существуют физические, химические и биологические способы деконтаминации кормов от токсигенных, патогенных грибов и микотоксинов. Однако большинство физических и химических методов детоксикации дорогостоящие, требуют больших производственных затрат, иногда отрицательно влияют на показатели качества кормов и незначительно снижают количество микотоксинов.

На основе выделенного изолята B. subtilis в ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" разработан препарат «Микосубтил» для обработки кормов, контаминированных микотоксинами. Целью работы явилось изучение обезвреживающей способности биологического препарата «Микосубтил» кормов, загрязненных Т-2 и афлатоксином В1.

При проведении опытов использовали корма, естественно и экспериментально загрязненные микотоксинами. Для загрязнения кормов применяли стандартные образцы микотоксинов (афлатоксин В1 и Т-2 токсин, каждый из которых был в концентрации 500 мкг/кг корма), синтезированных в лаборатории микотоксинов. В качестве продуцента Т-2 токсина использовали Fusarium sporotrichiella штамм 2M15, представленный профессором Котиком А.Н., афлатоксин В1 – Aspergillus flavus из коллекции центра. Для этого 100 г зерна помещали в кол. у вместимостью 1 л. Зерно увлажняли 100 мл водопроводной воды, выдерживали 2 часа при частом встряхивании, а затем стерилизовали при давлении 1 атм. 30 минут. Для заражения субстрата применяли двухнедельную культуру продуцента. Зараженный материал инкубировали в термостате при температуре 26-27°С в течение 10 суток. В период ферментации 2 раза в день колбы с субстратом интенсивно встряхивали. Готовую культуру стерилизовали при 1 атм. 15-30 мин, затем помещали в бумажные пакеты, сушили при температуре 40-45°С и размалывали на лабораторной мельнице.

Количество афлатоксина В1 определяли методом ВЭЖХ, Т-2 токсина – биоавтографии, согласно методическим указаниям (Б.И. Антонов, 1991). Биоавтографическое проявление хроматограммы осуществляли с использованием тест-культуры Candida pseudotropicalis, штамм 44 пк, представленный Котиком А.Н. (1985), с подтверждением результатов с помощью хроматомаспектрометрического анализа, который осуществляли на приборе «Хитачи-80м».

Использование препарата «Микосубтил» позволило значительно снизить содержание афлатоксина В1 в субстрате. Так, при внесении в субстрат препарата в концентрации 2 млр.. микр. кл. чере. 24 ч микотоксин не обнаруживался, а при воздействии препарата в концентрации 1 млрд. микр. кл. выявлялись лишь следовые количества (0,001мг/кг). Использование микосубтила для обезвреживания в концентрациях 0,5 и 0,2 млрд. микр. кл. снизило содержание афлатоксина В1 в среде через 48 ч на 95-92,5%. Следовые количества микотоксина обнаруживались спустя 72 ч после обработки. В контрольной првбе на протяжении всего периода исследования количество афлатоксина В1 не изменялось.

Применение микосубтила позволило значительно снизить и содержание Т-2 токсина в корме. При внесении в субстрат препарата в концентрации 2 млрд. микр. кл. через 1 ч микотоксин обезвреживался на 92,2%, а в концентрации 1 млрд. микр. кл. - на 81,5%. При использовании препарата для обезвреживания в концентрациях 0,5 и 0,2 млрд. микр. кл. содержание Т-2 токсина снизилось на 61,1 и 43,1% соответственно. Следовые количества микотоксина обнаруживались спустя 24 ч после обработки в концентрации 1 млрд микр. кл. В контрольной пробе на протяжении всего периода исследования количество Т-2 токсина не изменялось. Скармливание кормов, обработанных препаратом, лабораторным (крысы, кролики) и сельскохозяйственным (овцы, подсвинки) животным позволило значительно снизить негативное влияние микотоксинов на организм животных. При этом у животных наиболее интенсивно протекали обменные процессы в организме, что свидетельствует об обезвреживающем действии препарата на корма, загрязненные микотоксинами. Использование препарата «Микосубтил» способствует значительному (на 92-95%) снижению Т-2 и афлатоксина в кормах.

Заключение: Перспективы дальнейших исследований заключаются в испытании препарата в отношении других микотоксинов.