Комплексный подход к диагностике инфекционных болезней крупного рогатого скота

В патологии крупного рогатого скота особое место занимают инфекционные болезни, обусловленные вирусами, бактериями, простейшими, паразитами. Они распространены повсеместно и представляют собой серьезную проблему для промышленного животноводства в большинстве стран мира. Особое место занимают вирусы, которые не только вызывают самостоятельные заболевания, но в большинстве случаев играют пусковую роль для развития многих бактериальных инфекций. Наиболее опасные вирусные болезни, такие как: ящур, блютанг, чума, энзоотический лейкоз, инфекционный ринотрахеит/инфекционный пустулезный вульвовагинит (ИРТ/ИПВ), вирусная диарея (ВД), внесены в перечень болезней, методы диагностики и профилактики которых регламентируются стандартами Всемирной организации здравоохранения животных (OIE)*. Другие болезни, такие как: парагрипп-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальная (РСИ), рота-, корона-, и аденовирусная инфекции крупного рогатого скота не входят в перечень болезней OIE, однако представляют серьезную экономическую проблему для промышленного животноводства.

Большинство инфекционных болезней крупного рогатого скота невозможно распознать только по клиническим признакам и патологоанатомическим изменениям. При их диагностике необходимо учитывать мультифакторную этиологию, клинические проявления, серологическую картину, возможность бессимптомной персистентной инфекции, а также возможное использование живых вакцин. В большинстве случаев необходимо проведение лабораторных исследований для подтверждения диагноза и определения этиологической роли конкретного инфекционного агента. В этой связи наиболее эффективным лабораторным подходом является проведение имеющимися методами (молекулярно-биологическими и иммунологическими) комплекса исследований, направленных как на идентификацию возбудителя (полимеразная цепная реакция – ПЦР; секвенирование генов), так и на выявление специфических антител (реакция нейтрализации – РН, иммуноферментный метод – ИФА и др.). Такой комплексный подход является не- обходимым звеном в системе проведения дальнейших ветеринарно- санитарных мероприятий и основным аргументом для применения в хозяйстве средств специфической профилактики.

Сложно охватить все аспекты комплексного подхода к диагностике инфекционных болезней в одном выступлении, поэтому конкретизируем его примерами двух проблем, этиологическими агентами которых выступают вирусы и микобактерии.

Комплексный подход к диагностике ИРТ/ИПВ и ВД крупного рогатого скота. ИРТ/ИПВ и ВД крупного рогатого скота являются одной из главных проблем молочного и мясного животноводства, для их ликвидации в ряде стран разработаны Национальные программы по искоренению болезней, однако в большинстве случаев меры борьбы основаны на вакцинации, проведении санитарно-гигиенических мероприятий и удалении из стада инфицированных животных. Повсеместно применяемые моно- и ассоциированные вакцины предотвращают появление клинических признаков, снижают количество абортов, сокращают выделение вируса во внешнюю среду, однако не предохраняют от инфицирования. Зачастую бессистемное применение вакцин (прежде всего, живых) в хозяйстве затрудняет интерпретацию результатов исследований, проведенных в одном направлении. В этой связи при подозрении на эти болезни алгоритм комплексных исследований может выглядеть следующим образом:

1) Исследование спермы быков-производителей методом ПЦР* для исключения (или подтверждения) передачи вирусов в процессе осеменения коров.

2) Исследование сыворотки крови безмолозивных телят на наличие противовирусных антител методами ИФА3 и РН4 для исключения возможности (или подтверждения) внутриутробного инфицирования плодов.

3) При наличии абортов - исследование биоматериала плода методом ПЦР на наличие вирусов.

4) Обследование нетелей и телят:

- выявление специфических антител в сыворотке крови методами РН и ИФА;

- исследование биоматериала (особенно при наличии павших животных) методом ПЦР.

5) Серологические исследования коров-матерей методами ИФА* и РН**, выборочно – исследование их секретов и смывов методом ПЦР на наличие возбудителя.

6) При получении положительных результатов ПЦР ( п. 1, 3 - 5) – генетический анализ вирусов с помощью секвенирования их генов*.

7) Сопоставление результатов лабораторных исследований с результатами эпизоотологического обследования и патологоанатомического диагноза.

Комплексный подход к диагностике туберкулеза. При инфицировании млекопитающих M.bovis доминирующим является клеточный иммунный ответ, поэтому при диагностике туберкулеза большое значение имеют методы, направленные на оценку функциональной активности Т-лимфоцитов. К ним относятся внутрикожная туберкулиновая проба (ВТП, основной тест, рекомендованный OIE), реакция бласттрансформации лимфоцитов и «сэндвич»-ИФА на основе моноклональных антител, предназначенный для выявления γ-интерферона в крови инфицированных животных (γ-ИФН ИФА). ВТП характеризуется высокой чувствительностью, однако основным недостатком этого метода является достаточно большой процент ложноположительных реакций, возникающих вследствие перекрестной реактивности между антигенами разных видов микобактерий. γ-ИФН ИФА является одним из наиболее эффективных методов прижизненной диагностики туберкулеза. В настоящее время этот метод наряду с ВТП является узаконенным методом диагностики туберкулеза крупного рогатого скота во многих странах мира. При проведении исследований на территории нашей страны (2000-2004 гг.) была показана высокая эффективность метода и сделано заключение о том, что γ-ИФН ИФА целесообразно использовать как дополнительный метод прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в целях дифференциации аллергических реакций на туберкулин. Исследования с помощью метода γ-ИФН ИФА рекомендуется проводить через 7-30 суток после проведения плановой туберкулинизации*.

Помимо этого для дифференциации M.bovis от M.tuberculosis целесообразно провести исследования методом ПЦР.

Заключение. В настоящее время в арсенале отечественных ветеринарных лабораторий имеются практически все современные и качественные диагностические тест-системы и наборы. Для специалистов необходим творческий подход к проведению комплексных исследований с их помощью, особенно в случае возникновения проблем в хозяйствах, обусловленных патогенами неизвестной этиологии. Результаты комплексных исследований помимо непосредственной постановки окончательного диагноза, могут дать ответ на вопросы, касающиеся степени распространения искомых патогенов в популяции животных, их возможного негативного эффекта на пищевые продукты и организм человека, необходимости проведения ветеринарно-санитарных мероприятий и выбора вакцин.